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| 文件大小： |
224.71KB |
| 文件类型： |
PDF编辑 + RAR压缩 |
| 发布日期： |
2011-03-02 |
| 适用年级： |
临床医学专业大三下学期 |
| 资料来源： |
精品课程 |
| 下载次数： |
12468 |
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| 资源相关信息 |
本站资源解压密码：myncmc.com |
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高级医学实验技术和实验室安全防护见习指导
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目 录
实验(见习)课的一般要求---------------------------------2
见习一 实验室常用科研仪器的使用------------------------2
见习二 激光扫描共聚焦显微镜及免疫组织化学染色技术------6
见习三 细胞培养技术与流式细胞术------------------------9
见习四 透射电镜技术------------------------------------11
主要参考书---------------------------------------------13
一、上课须知
1．准备工作
(1) 上课前应阅读本实验中相应部分，明确实验的内容和要求。
(2) 根据实验内容阅读教材中的有关章节，弄清基本概念和方法，使实验能顺利完成。
实验（见习）课的一般要求
见习一 实验室常用科研仪器的使用
一、见习目的
1．掌握离心机、双蒸水器、高压灭菌锅等常用仪器设备的使用。
2．熟悉消毒、灭菌与无菌操作、免疫印迹等基本技术的原理。
二、仪器设备
三、见习方法
见习内容一 离心机的使用
一、原理：在离心力场的作用下，加速悬浮液中固体颗粒沉降（或漂浮）速度。
二、操作方法
2．按open键（机器电子锁开），打开机器盖。
4．根据转子选择适合的离心管，将样品装入一对离心管后，在托盘天平上调节使它们质量相
3．过滤除菌主要是选用孔径小的微孔材料制作成专门的细菌滤器，通过减压过滤，达到除菌。
4．紫外线灭菌是指在波长200nm-300nm之间，紫外线诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA
四、适用范围
适用于任何无菌操作的实验。如：细胞传代培养、植物组织培养、细菌接种、微生物的
各种高压蒸汽灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌的原理和操作技术；无菌室、超净工作台的
五、操作步骤
六、注意事项
见习内容三 蛋白质免疫印迹（Western Blot）
一、实验原理
1)用PBS缓冲液洗膜5～10 rain。
2)将膜用封闭溶液封闭，用摇床轻摇(37℃)60 min。
3)用PBS缓冲液洗膜3次，每次10 min。
4)将膜置于第一抗体溶液(小牛血清免疫兔的抗血清，1：10)中，置摇床上轻摇，37℃摇动2 h或4℃过夜。
见习二 激光扫描共聚焦显微镜及免疫组织化学染色技术
见习内容一 激光扫描工聚焦显微镜技术
见习内容二 免疫组织化学S-P法染色原理及步骤
见习三 细胞培养技术与流式细胞术
见习内容一 细胞培养技术录像资料与培养细胞在倒置相差显微镜下的照片ppt
见习内容二 流式细胞仪的基本结构及使用
一、工作原理：利用荧光技术，在不同的鼠抗人的抗体上标上荧光素，此荧光
抗体就同人淋巴细胞表面的CD分子特异性的结合；然后用流式细胞仪检测，结
合分析软件的自动分析,便可以得出各亚群细胞的百分比。
见习四 透射电镜技术
快速检查合轴的方法：
操作钮（键）参量的选择及使用方法：其参量由使用者根据样品、分析、记录等条件而定。
（三）电镜使用中的注意事项：
1．注意力集中，防止误操作按钮、按键。
2．更换电镜样品时，不可使样品夹持器受到污染。
3．注意冷却循环水的流量，防止电镜受到损坏。
主要参考书
1. 《生物医学超微结构与电子显微镜技术》洪涛主编，科学出版社，1980．
2. 《Principles and Techniques of Electron Microscopy》Hayat. M. A.(editor)．
3. 《医用.生物学电镜技术与细胞超微结构》应国华主编，香港现代出版社．
4. 《生物电子显微术教程》陈力主编，北京师范大学出版社，1998.6．
5. 《细胞超微结构与电镜技术》 凌诒萍 俞彰主编，上海医科大学出版社2000.8．
6. 《高等学校实验室安全概论》，浙江摄影出版社出版，2006．
7. 《激光扫描共聚焦显微镜技术教程》袁兰 主编 北京大学医学出版社，2004．
8. 《激光扫描共聚焦显微镜显微术》李楠，王凤翔，周春喜主编 人民军医出版社，1997．
9. 《激光扫描共聚焦显微镜技术》王春梅，黄晓峰，杨家骥，陈志南主编 第四军医大学出版社，2004．
10. Molecular clone (3th Edition)．
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