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| 华北理工大学医学信息平台 2013-11-19 来源: 原创 点击数：12451 |
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集区；脯氨酸富集区。
5.简述顺式作用元件的特点。
答：（1）是具有蛋白质结合位点的一段特异性DNA序列。
（2）通过“DNA-蛋白质”相互作用可以对基因的转录产生影响。
（3）与所调控的基因在同一DNA序列上。 （4）多为反转重复序列。
6.基因诊断的策略是什么？
答:1)从基因的产物入手；2）从基因定位入手；3）从比较正常基因和异常基因的差异入手；4）从基因表达的差异入手；5）从寻找外援基因入手。
7.用于基因诊断的PCR相关技术有哪些？
答：1）普通PCR；2）反转录PCR；3）原位PCR；4）多重PCR；5）实时PCR：利用荧光染料发出的荧光通过计算机分析对PCR过程实施随时监控，可推算出体系中模板DNA数量的PCR技术。包括SYBR GREENI检测模式；杂交探针检测模式；水解探针检测模式。 6)PCR-SSCP7)PCR-RFLP 8)PCR-ELISA9)PCR-SNP
8.基因治疗的策略有哪些？
答：1）代偿性基因治疗：通过对有代偿功能的基因的正调控开启其关闭状态来代偿功能异常的基因。
2）补偿性基因治疗：把正常基因导入体内并表达，以补偿缺陷基因表达的不足或缺失。
3）替代性基因治疗：以正常基因原位替换缺陷基因。
4）性细胞基因治疗：性细胞或干细胞补偿性基因治疗。
5）调控性基因治疗：通过导入编码调控蛋白的基因以治疗基因表达异常的基因。
6) 反义性基因治疗：以反义寡核苷酸或表达反义mRNA的载体导入。
7）活化前体药理性基因治疗：导入能使无细胞毒性药物转化为有细胞毒性药物的酶的基因以杀伤癌细胞。
8）免疫性基因治疗：导入能使抗体产生抗病毒或抗肿瘤的免疫性基因以达到免疫治疗作用。
9）抗细胞毒性基因治疗：将具有产生抗细胞毒性药物蛋白基因导入人体细胞以提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力。
10）特异性细胞杀伤：利用DNA重组技术科造成以特异性杀伤靶细胞为目的的神奇弹头在基因治疗试验中特异性杀伤肿瘤细胞。
9.简述基因工程的基本步骤。
答：1、DNA片段的取得（目的基因的分离和制备） 2.DNA片段和载体的连接——重组体DNA —— 切接
3.将重组DNA分子转移到适当的宿主细胞，使之在细胞内 复制，扩增。
4.从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得重组DNA分子的宿主细胞克隆。
5.这些筛选出的宿主细胞克隆中提取已经得到扩增的目的基因，做序列分析鉴定。
6.将目的基因克隆到表达载体上，导入宿主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生人类所需的物质。
7.对基因表达产物进行分离纯化。
10.作为基因工程中使用的基因载体有哪些特性？
答：（1）必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到运载体上去。
（2）必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。
（3）必需带有标记基因，以便重组后进行重组DNA分子的辨认和筛选。
（4）必需是安全的，不会对受体细胞有害，也就是能够安全地“借居”在受体细胞中。
（5）比较容易得到，分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作。
11. 简述信号传导中的主要分子开关。
答：分子开关是细胞内信号传递中的蛋白质，通过激活机制和失活机制来对信号传递的级联反应进行精确控制。细胞内信号传递作为分子开关的蛋白质可分两类：一类开关蛋白（switch protein）的活性由蛋白激酶使之磷酸化而开启，由蛋白磷酸酯酶使之去磷酸化而关闭，许多由可逆磷酸化控制的开关蛋白是蛋白激酶本身，在细胞内构成信号传递的磷酸化级联反应；另一类主要开关蛋白由GTP结合蛋白组成，结合GTP而活化，结合GDP而失活。
12. 简述Wnt信号途径的拮抗剂及其主要机制。
答：拮抗剂：（1）分泌性的卷曲相关蛋白 (sFRP) 类成员包括 sFRP（ SFRP1、 SFRP2、SFRP3、 SFRP4、 SFRP5 ）、Wif-1 和 Cerberus，它们直接与 Wnt 配体结合，从而改变了 Wnt 与受体结合的能力。
（2）Dkk 类（ Dkk1、 Dkk2、 Dkk3和Dkk4）只结合 Wnt 受体复合体的一个亚基。Dkk-1 与 Wnt 受体 LRP5/6 及穿膜蛋白 Kremen1/2 结合形成三聚体，诱导快速的细胞内吞，减少了细胞膜上的 LRP5/6，由此阻断了 Wnt 信号向胞内的传递。
主要机制：（1）Wnt 蛋白与细胞表面受体卷曲蛋白 (frizzled，Fz) 家族和辅助受体低密度脂蛋白 LRP5/6 家族结合形成三聚体后，将信号传递给Dsh。
（2）由Axin、APC和GSK-3β和β-catenin 组成的降解复合物，使β-catenin被GSK-3β磷酸化降解。
（3）当β-catenin进入细胞核内，即可与转录因子TCF/LEF结合，激活TCF转录活性，启动下游靶基因的转录。
13.克隆羊的意义。
（1）在理论上证明了，分化了的动物细胞核也具有全能性，在分化过程中细胞核中的遗传物质没有不可逆变化；
（2）在实践上证明了，利用体细胞进行动物克隆的技术是可行的，将有无数相同的细胞可用来作为供体进行核移植，并且在与卵细胞相融合前可对这些供体细胞进行一系列复杂的遗传操作，从而为大规模复制动物优良品种和生产转基因动物提供了有效方法。
14.简述转基因动物的基本原理。
将目的基因（或基因组片段）－>用显微注射等方法注入实验动物的受精卵或着床前的胚胎细胞中－>使目的基因整合到基因组中－>然后将此受精卵或着床前的目的胚胎细胞再植入受体动物输卵管（或子宫）中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物－>分析转基因动物表型，揭示外源基因的功能，或者通过转入外源基因培养优良的动物品种
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